智能热板仪/热板测痛实验测试方法及注意事项

仪器介绍

热板装置由一块金属板，微处理器控制的加热装置和带盖（有通气孔）的透明圆柱形（直径20 cm × 高度30cm）有机玻璃观察室组成。显示屏可以实时显示金属板的温度。圆柱形观察室用于将实验动物限制在金属板上并防止其从设备上跳下。建议选配摄像装置用于辅助观察和拍摄实验用图，也便于回溯分析。

智能热板仪，型号：XR1700

实验动物的选择

疼痛的动物模型受到多种调节因素的重要影响，包括性别、基因型和社会交流，在使用动物模型时必须考虑所有这些因素。

在实验动物的性别上，热板测试一定要选择雌鼠，因为雄鼠是有睾丸的，实验时阴囊的皮肤会不可避免地紧贴于金属热板，睾丸对热的感受比爪子更敏感，因此产生了混淆效应。而且鼠会异常暴躁，影响实验。疼痛研究中最-常-用的动物是实验室大鼠，基本的热板实验可以选择年轻的成年雌性Sprague Dawley大鼠。但是最近将这些疼痛模型应用于具有靶向基因突变的小鼠已被证明是一种强大的工具，然而，大鼠和小鼠的行为反应可能不同。正如Mogil等人简洁地解释的那样，“小鼠不是小的大鼠”。如果首-次将已建立的大鼠模型应用于小鼠，请务必牢记这一点。

对于转基因小鼠是否可以作为疼痛模型，虽然充满了解释的复杂性，但是转基因技术改变了基本的疼痛研究，即使在没有选择性配体或抗体的情况下，也可以研究单个蛋白质在疼痛中的作用。这项技术也意味着许多实验室已经从使用大鼠转向使用小鼠了。这种转变并非没有代价：在许多实际方面，小鼠作为疼痛实验对象不如大鼠。但广泛使用转基因小鼠的一个幸运结果是越来越关注遗传背景对疼痛敏感性的影响。

测试流程

1、实验材料

1)最佳年龄的小鼠或大鼠（一般是6至8周）。

2)测试药物和溶剂对照。

3)热板装置（可配备表面温度计，用于校准和维护设备）。

2、适应

1)将动物从饲养室转移到实验室，称重并记录，让动物适应实验室环境至少半小时。

2)设置金属板温度与测试室的温度匹配并清洁测试板表面。

3)将单个受试者动物放入测试小室中，不受干扰地探索15分钟。

4)取出动物并清洁板表面的任何尿液或粪便。

3、测试

1)将热板温度设置为测试温度，范围通常在 50 °C～56 °C之间。

2)一旦达到预设温度，将适应好的实验动物放在热板上。

3)测量第一次出现伤害反应（例如，舔足，后爪抬起或跳跃）的潜伏期。设置终止时间，例如给药后，动物没有明显的伤害感受反应，则必须在提前规定的终止时间后将动物从热板上移开，以免对动物造成组织损伤。

4)出于伦理原因，出现伤害反应后应快速将动物从测试表面上移开，以避免不必要的痛苦和/或组织损伤。

5)将测试过的动物放入与未测试的动物分开的笼子中。大/小鼠可以通过各种嗅觉和超声波系统进行交流，这可能是焦虑和恐惧的来源。

6)将测试板温度恢复到室温，并清洁金属板的表面。

4、测试多种温度

如果在多个温度下测试相同的小鼠，则应将测试分开至少24小时，以避免压力和重复测试对潜伏期时间的影响。

注意事项

1.可以预选30 s内有疼痛反应的动物进行实验，将逃避、跳跃等不安定的实验动物剔除。

2.实验前一定要让动物适应环境和装置，暴露于新环境可能会掩盖或改变潜伏期数据。

3.每只动物测试结束后一定要清洁金属板，因为后爪上的尿液或粪便可能会改变测试板的传热特性，同时避免上一只动物的气味对下一只测试动物的影响。

4.伤害性反应包括前爪缩回或舔舐，但不建议使用前爪的反应作为观察指标，因为前爪通常参与梳理和探索行为，并且与金属表面的接触不一致。后爪缩回或舔舐被认为是伤害感受的更可靠指标。不过，简单的后爪抬起也可能是由于梳理和探索。

5.不建议短时间内重复测试。在有害甚至无害的温度下反复暴露于热板测试可能降低行为反应的潜伏期。

在未加热时对小鼠的“正常”行为进行观测是必要的，以便可以注意到伤害性测试期间行为的任何差异。同样重要的是要注意是否有任何其他因素可能影响疼痛行为，例如梳理、睡觉、排便或因噪音或光线水平的变化而分散注意力。